Red Blood Cell related methods
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Methoden zur Erythrozytenserologie
The Rhesus Site
Methode
Bestimmung des Rh-Merkmals D		 Method
Typing for antigen D
nach den "Richtlinien 2000", gültig seit 7. Juli 2000
vorgeschrieben für die Blutspender- und Patientenuntersuchung in Deutschland
frühere "Richtlinien 1996": siehe unten		 adapted from the "German Guidelines 2000", valid since 7 July 2000
current mandatory method for the blood donor and patient typing in Germany
previous "German Guidelines 1996": see below
Reproduced literally from the "German Guidelines". The text is rendered into English by closely adhering to the German original. Hence, please apologize for the sometimes "unusual" English wording.
 
2.5
Blutgruppenserologische Untersuchungen bei Blutspendern		 Chapter 2.5
Blood group serologic typing in blood donors
[...] Das Rh-Merkmal D tritt in unterschiedlichen Ausprägungsformen auf (s. Abschnitt 4.2.5.5). [...] The Rh antigen D occurs in different types of expression (see chapter 4.2.5.5).
Die Untersuchung des Rh-Merkmals D erfolgt mit mindestens zwei verschiedenen Testreagenzien. Bei Blutspendern muss auch jedes schwach oder nur partiell ausgeprägte Rhesus-Antigen D zuverlässig erfasst werden. Dies kann beispielsweise durch Einsatz geeigneter polyklonaler oder oligoklonaler Reagenzien gegen das Rh-D-Merkmal im indirekten Antihumanglobulintest (AHG-Test) erreicht werden. Um Fehlbestimmungen zu vermeiden, sind regelmäßig positive und negative Kontrollen mit D-positiven und D-negativen Testerythrozyten sowie jeweils Eigenkontrollen (Prüfung auf Autoagglutination) mitzuführen. Blutspender, die ein schwach oder partiell ausgeprägtes Rh-Antigen D besitzen, sollten als Rh-positiv (z.B. weak D-positiv) deklariert werden. Bei negativem Ergebnis aller Testansätze gelten Blutspender als Rh (D) negativ. Bei übereinstimmend positivem Ergebnis und bei diskrepantem oder schwach positivem Ergebnis gilt der Blutspender als Rh (D) positiv. The typing of the antigen D requires at least two different test reagents. In blood donors, even a weakly or only partially expressed Rhesus antigen D must be detected reliably. This may be achieved, for example, by using suitable polyclonal or oligoclonal reagents reacting with the Rh antigen D using the indirect antiglobulin test (IAT test). To avoid mis-typings, positive and negative controls have to be performed on a regular basis using D-positive and D-negative test erythrocytes; as well as autocontrols (checking for auto-agglutination) have always to be performed. Blood donors who carry a weak D or partial D should be typed as Rh positive (e.g., weak D positive). If all tests yield negative results, blood donors are considered Rh negative. If concordant positive results as well as discrepant or weak positive results are obtained, the blood donor is considered Rh positive.
4.2.5.5
Bestimmung des Rh-Merkmals D		 Chapter 4.2.5.5
Typing for Rh-antigen D
Das Rh-Merkmal D tritt in unterschiedlichen Ausprägungsformen auf:
- als ein voll ausgeprägtes Merkmal, welches typisch ist für Rh positiv (D positiv),
- als ein abgeschwächtes und/oder in seiner Ausprägung verändertes Merkmal: entweder als schwach ausgeprägtes Antigen D (weak D) oder als qualitativ deutlich verändertes D-Antigen (partial D), welches gleichzeitig auch schwach ausgeprägt sein kann (z. B. D-Kategorie VI = DVI). Träger mit einem qualitativ deutlich veränderten D-Antigen können durch ein voll ausgeprägtes Rh-Merkmal D immunisiert werden, besonders Träger der Kategorie DVI.		 The Rh antigen D occurs in different forms of expression:
- as a fully expressed antigen, which is typical for Rh positive (D positive),
- as a weakly expressed or as an in its expression changed antigen or both: either as an weakly expressed antigen D (weak D) or as a markedly (qualitatively) changed antigen D (partial D), which may at the same time be expressed in a weak form (e. g., D category VI = DVI). Carriers of a markedly changed antigen D may be immunized by a fully expressed antigen D; this applied in particular to carrieres of the D category VI.
Die Bestimmung des Rh-Merkmales D erfolgt bei Patienten und bei Blutspendern auf unterschiedliche Weise (s. Abschnitt 2.5). The typing of the Rh antigen D is performed in a different way for patients and for blood donors (see chapter 2.5 above).
Bei Patienten, Schwangeren und Neugeborenen erfolgt die Untersuchung des Rh-Merkmals D mit mindestens zwei Testreagenzien. Für diese Untersuchung wird die Anwendung zweier monoklonaler Antikörper der IgM-Klasse, die die Kategorie DVI nicht erfassen, empfohlen.

(4.2.5.2 Testreagenzien [...] Für den Fall, dass mit zwei verschiedenen Reagenzien getestet werden soll (z. B. Abschn. 4.2.5.5), ist bei der Verwendung monoklonaler Testreagenzien darauf zu achten, dass Reagenzien unterschiedlicher Klone verwendet werden.)

 For patients, pregnant women and newborns, the typing of the Rh antigen D requires at least two test reagents. The application of two monoclonal antibodies of IgM type that do not detect the D category VI is recommended.

(4.2.5.2 Test reagents [...] In case that typing should be done with two different reagents (e. g., chapter 4.2.5.5), it has to be observed - while using monoclonal reagents - that reagents of different clones are applied.)
Eine Kontrolle zur Prüfung auf Autoagglutination muss bei jeder Bestimmung des Rh-Merkmals D mitgeführt werden und eindeutig negativ sein.

Bei negativem Ergebnis aller Testansätze gelten potentielle Empfänger von Blut, einschließlich Schwangeren und Neugeborenen, als Rh negativ (D negativ).

Bei übereinstimmend positivem Ergebnis und auch bei unzweifelhaft schwach positivem Ergebnis ist der Patient Rh positiv (D positiv).

Bei diskrepanten oder fraglich positiven Ergebnissen der Testansätze mit monoklonalem IgM-Anti-D ist der Patient als “Empfänger Rh negativ (D negativ)” zu deklarieren. Eine weitere Klärung sollte angestrebt werden.

 A control for checking for auto-agglutination has to be included in each typing for the Rh antigen D and has to be unambiguously negative.

If all tests yield negative results, the potential recipients of blood, including pregnant women and newborns, are considered Rh negative (D negative).

If concordant positive results as well as undoubtedly weak positive results are obtained, the patient is considered Rh positive (D positive).

In case of discrepant or questionably positive results of typing with monoclonal IgM-anti-D, the patient should be considered as "Recipient Rh negative (D negative)". A clarification (typing in reference lab) should be sought.
4.2.5.13
Schreibweise der Befunde		 Chapter 4.2.5.13
Spelling/documentation of results
Die nachfolgende Schreibweise sollte einheitlich verwandt werden, um Missverständnisse zu vermeiden: The following spelling should be used consistantly, to avoid misconceptions:
Erythrozytenmerkmale:
AB0-System: 
A
B
0
AB		 Erythrocyte antigens:
ABO blood group system: [Please note that there is a systematic difference in usage, as the the antigen O is, in German and some other languages, written as "0" and pronounced "null". As it happens, this usage represents the historically correct spelling and has been shown since to be consistant with the biologic basis of the "antigen O". Hence, the usage of "0" has been maintained in the Guidelines 2000 despite some recent standardization attempts favoring "O".]
Untergruppen des AB0-Systems:
Die Untergruppen werden durch Zusätze gekennzeichnet, z. B. A(1), A(2), A(1)B, A(2)B.		 Subgroups in the ABO system:
Subgroups are marked with indices, e. g.. A(1), A(2), A(1)B, A(2)B.
Rh-System (Rh):
Im Rh-System existieren mehrere Nomenklaturen. Im folgenden wird eine Schreibweise beispielhaft empfohlen, der transfusions- medizinische Aspekte zugrunde liegen:

Rh positiv (D positiv) und Rh positiv (weak D positiv)
CcD.ee
CCD.ee
CcD.Ee
ccD.EE
ccD.ee

Rh negativ (D negativ) sind Personen mit folgenden Merkmalen im Rh-System:
ccddee
Ccddee
ccddEe
CcddEe
usw.
sowie mit entsprechenden Formeln mit Cw und anderen Rh-Merkmalen.

 RH blood group system (RH):
There are several nomenclatures for the RH blood group system. In the following paragraphs, examples are shown for a recommended spelling that is based on transfusion medical aspects:

Rh positive (D positive) and Rh positive (weak D positive)
CcD.ee
CCD.ee
CcD.Ee
ccD.EE
ccD.ee
[Please note the "." deviates from scientific notation and English usage.]

Rh negative (D negative) are individuals carrying the following antigens of the RH blood group system:
ccddee
Ccddee
ccddEe
CcddEe
and so forth
as well as the respective phenotypes with Cw and other RH antigens.
If using the information provided herein, please give reference to the "The Rhesus Site" and the following literature:
Quelle/Source:
Wissenschaftlicher Beirat der Bundesärztekammer, Paul-Ehrlich-Institut. Richtlinien zur Gewinnung von Blut und Blutbestandteilen und zur Anwendung von Blutprodukten (Hämotherapie). Deutscher Ärzte-Verlag, Köln 2000, ISBN 3-7691-0389-0
zum Vergleich: früher gültige Methode for comparison: previously mandatory method
nach den "Richtlinien 1996"
gültig vom Dezember 1996 bis Juli 2000		 adapted from the "German Guidelines 1996"
valid from December 1996 through July 2000
2.5
Bestimmung des Rh-Merkmals D		 Chapter 2.5
Typing for Rh-antigen D
Die Untersuchung des Rh-Merkmals D erfolgt mit mindestens zwei verschiedenen Testreagenzien. Für die Untersuchung von Patientenblutproben wird die Anwendung zweier monoklonaler Antikörper (IgM-Typ), die die Kategorie DVI nicht erfassen, empfohlen.

Bei negativem Ergebnis beider Testansätze gelten potentielle Empfänger von Blut und Neugeborene als Rh-negativ (D-negativ). Bei übereinstimmend positivem Ergebnis der beiden Testansätze ist der Proband Rh-positiv. Bei diskrepanten oder schwach positiven Ergebnissen der Testansätze ist eine Klärung z.B. im indirekten Antiglobulintest mit geeigneten Testreagenzien notwendig. Fällt dieser Test positiv aus, so ist der Proband Rh positiv (Dweak positiv).

Bei Blutspendern müssen zusätzlich schwache D-Antigene (früher Du) erfaßt werden. Solche Spender sind als Rh positiv (Dweak positiv) zu bezeichnen.

Um Fehlbestimmungen zu vermeiden, sind regelmäßig positive und negative Kontrollen mit D-positiven und D-negativen Testerythrozyten sowie jeweils Eigenkontrollen (Prüfung auf Autoagglutination) mitzuführen.

 The typing of the antigen D requires at least two different test reagents. For typing blood samples of patients, the application of two monoclonal antibodies (IgM type) that do not detect the D category VI is recommended.

If both tests yield negative results, the potential recipients of blood and newborns are considered Rh negative (D negative). If concordant positive results are obtained in both tests, the proband is considered Rh positive. In case of discrepant or weak positive results of the typing, a clarification - e. g. by using an indirect antiglobulin test with suitable reagents - is required. If this test is positive, the proband is considered Rh positive (Dweak positive).

In blood donors, weak antigen Ds (formerly Du) have to be detected in addition. Such donors are considered Rh positive (Dweak positive).

To avoid mis-typings, positive and negative controls have to be performed on a regular basis using D-positive and D-negative test erythrocytes; as well as autocontrols (checking for auto-agglutination) have always to be performed. 
Quelle/Source:
Wissenschaftlicher Beirat der Bundesärztekammer, Paul-Ehrlich-Institut. Richtlinien zur Blutgruppenbestimmung und Bluttransfusion (Hämotherapie). Deutscher Ärzte-Verlag, Köln 1996, ISBN 3-7691-0341-6 (not available anymore; replaced by the "German Guidelines 2000" - see above).
A random survey in German blood donors was performed to evaluate the typing procedure before its recommendation in the "German Guidelines 1996": Wagner, F.F., Kasulke, D., Kerowgan, M., Flegel, W.A.: Frequencies for the blood groups ABO, Rhesus, Kell, D category VI, and for clinically relevant high frequency antigens in South-Western Germany. Infusionsther. Transfusionsmed. 22: 285 - 290, 1995
Homepage Abteilung Blutgruppenserologie und Immunhämatologie, DRK-Blutspendedienst Baden-Württemberg, Institut Ulm
Sponsored by the DRK-Blutspendedienst Baden-Württemberg gGmbH, Stuttgart